C4色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的產(chǎn)品。它使用3微米粒徑的硅膠填料，優(yōu)化了孔徑，固定相配體的烷基鏈長(zhǎng)及表面鍵合密度，可實(shí)現(xiàn)高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實(shí)現(xiàn)快速分析。

 

　　C4色譜柱在使用前，先進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。

　　在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照C4色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。

　　1、樣品的前處理：

　　①先使用流動(dòng)相溶解樣品；

　　②使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；

　　③使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。

 

　　2、流動(dòng)相的配制：

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

　　①流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中；

　?、诹鲃?dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)；

　?、哿鲃?dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命；

　?、芰鲃?dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制；

　?、萘鲃?dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行；

　?、拊诹鲃?dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

 

　　3、流動(dòng)相流速的選擇：

　　因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的C4色譜柱，要追求較佳柱效，使用較佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的C4色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

　　當(dāng)選用較佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間。